常见问题解答：玻璃底培养皿 • MatTek Life Sciences

来自 : 发布时间：2024-05-14

常见问题解答：玻璃底培养皿

培养皿使用问题 1：玻璃底培养皿通常如何使用？MatTek 的玻璃底培养皿有无涂层或涂有聚-d-赖氨酸或胶原蛋白的可供选择。所有培养皿都经过伽马射线照射，以确保无菌。

其使用的一般程序如下。

保持无菌：在无菌环境（例如层流罩）中打开培养皿。预平衡培养皿：用培养基孵育培养皿。将 2-3 ml 培养基移入 35 mm 培养皿中，或将 3-4 ml 培养基移入 50 mm 培养皿中，并在 37° C 下孵育 15 分钟。将细胞悬浮液添加到微孔中：通过抽吸除去培养基，并将细胞铺在玻璃表面上。将 250 µl 细胞悬液（悬浮在培养基中的细胞）移入 10 mm 直径的微孔中，将 500 µl 细胞悬液移入 14 mm 微孔中，或将 1 ml 细胞悬液移入 20 mm 孔中。将培养皿在 37° C 下孵育 1 小时。添加额外的培养基：1 小时后，轻轻填充剩余的培养皿sh 用介质。在 35 毫米培养皿中添加 2-3 毫升，在 50 毫米培养皿中添加 3-4 毫升。

注意：在最初一小时让细胞附着到玻璃表面后，重要的是要将培养皿填充到正常水平，以尽量减少蒸发的影响并避免引起渗透压变化。问题 2：我应该使用哪种类型的玻璃底培养皿来培养细胞？很难预测哪种类型的玻璃底培养皿（无涂层、聚-d-赖氨酸涂层或胶原蛋白）涂层）最适合您的特定细胞类型。许多转化或癌细胞系在未包被的培养皿上可以生长良好。聚赖氨酸包被的培养皿非常适合神经元培养和许多原代细胞；其他细胞更喜欢胶原蛋白涂层。此外，许多研究人员购买我们的无涂层培养皿并涂上他们自己的专用涂层。您还可以在 Google 上搜索已发布的利用玻璃底培养皿和细胞的方法（见下文）。

注意：由于几乎所有显微镜物镜都针对我们进行了优化使用 1.5 号盖玻片时，1.5 号盖玻片厚度将产生最高质量的图像。问题 3：我如何搜索利用 MatTek 玻璃底培养皿的已发表方法？我们收集并编录了数千篇引用 MatTek 玻璃底培养皿使用的技术论文。您可以在我们的网站上搜索我们的编目出版物数据库。

注意：如果文献文章中未指定确切的玻璃底培养皿部件号，则可以安全地假设使用的是未涂覆的培养皿（例如部件号：P35G-1.5-14-C、P50G-1.5-30-F 等）。问题 4：如果我的细胞不生长或者我想改善玻璃底培养皿的生长，我该怎么办？聚-d-赖氨酸或胶原蛋白涂层适用于绝大多数细胞，一些客户发现有必要自己涂层玻璃底培养皿。他们购买未涂层的培养皿，并使用以下盐酸 (HCl) 预处理以及他们选择的涂层。

在无菌条件下条件下，将 250 µl 1 N HCl 移至无涂层 10 mm 玻璃底皿上（例如部件号：P35G-x-10-C 或 P50G-x-10-F）；分别对 14 mm 和 20 mm 玻璃底培养皿使用 500 µl 或 1 mL 1 N HCl（例如部件编号：P35G-x-14-C 或 P35G-x-20-C）。15 分钟后，倒出 HCl 并用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 冲洗培养皿 3 次，用超纯水冲洗培养皿 2 次。将涂层涂在培养皿上。添加相似体积的培养基，您将在其中铺板细胞以预平衡玻璃表面。将培养基在玻璃底培养皿中于 37°C 下孵育 15 分钟。取出培养基，然后铺板细胞。

要尝试未包被的玻璃底培养皿的样品，请访问我们的免费样品页面。问题 5：可以从玻璃底培养皿上取下盖玻片吗？可以，但对于大多数应用，可以使用各种倒置和正置显微镜在不取下盖玻片的情况下观察玻璃底培养皿中生长的细胞。

如有必要（例如，为了长期储存，rposes），盖玻片可以使用以下程序移除：

订购零件号 PDCF OS 30（用于从玻璃底培养皿移除盖玻片的液体）翻转培养皿的盖子。将 1.0 ml 液体吸移到倒置的盖子中。将培养皿的底部放在盖子上。确保倒置盖中的液体接触盖玻片底部。让培养皿在室温下在液体中静置 45 分钟。用吸水纸巾擦干盖玻片底部。将培养皿放在干净的表面上。使用镊子向下按压盖玻片的内边缘，将盖玻片与培养皿分离。

注意：如果遵循上述步骤，PDCF OS 30 液体将不会接触细胞，也不会破坏盖玻片上的细胞或其染色。盖玻片可以在不破损的情况下取下。问题 6：如何控制原位（实时）显微镜玻璃底培养皿的温度？

为了近似生理条件，温度可以通过使用显微镜载物台加热器和适当的载物台适配器来控制玻璃底培养皿中包含的介质的数量。

与 P35G 培养皿（康宁 35 mm 培养皿）一起使用：培养皿加热器（部件号：DH-35）、显微镜载物台适配器（部件号：SA 显微镜型）、加热器控制器（部件号：TC324-B）和连接电缆（部件号：CC-28）可从 Warner Instrument Corporation 购买。信息可在线获取：https://www.warneronline.com/Q7：为什么要使用包含网格盖玻片的玻璃底培养皿？网格的大小是多少？如果我看不到网格怎么办？

网格化盖玻片允许人们引用特定的细胞并随着时间的推移跟踪它们。例如，可以对单个细胞进行显微注射，返回培养箱，并在多个时间点进行观察，因为每个细胞都可以用培养皿中唯一的字母数字坐标进行识别。提供含有网格 Bellco 玻璃盖玻片的玻璃底培养皿。标准网格培养皿指定为部件号：P35G-1.5-14-CGR​​D 和 P50G-1.5-14-FGRD。

网格尺寸：部件号 P35G-1.5-14-CGR​​D 和 P50G-1.5-14-FGRD 上的网格由 520 个独特的字母数字方块组成。每个正方形的尺寸为 600 μm x 600 μm。线粗为20μm。网格可视化：使用 10 倍明场物镜时，网格应清晰可见。找到感兴趣的细胞后，只需切换到更高的放大倍率或荧光物镜即可。使用更高的放大倍率或荧光物镜将看不到网格。我看不到网格：汇合的单层细胞通常会掩盖网格，使其难以或不可能可视化。如果您的细胞已汇合，您可以使用部件号 P35G-1.5-14-CGR​​D-D，它将网格放置在培养皿的外部，不受盖玻片上生长的细胞的影响。要使用此培养皿，请找到感兴趣的细胞，然后向下聚焦到盖玻片的底部以获取其咕咕声

网格盖玻片（18 毫米 x 18 毫米，1.5 号厚度，非无菌，部件号 PCS-1.5-1818-GRD）可供购买。问题 8：如何使用玻璃底皿观察组织切片？MatTek 的玻璃底皿也可用于对组织切片进行成像。使用 Corning Cell-Tak 将切片粘附到培养皿上。一篇利用 MatTek 玻璃底培养皿对脑切片进行共焦显微镜检查的研究论文已经发布。问题 9：玻璃底培养皿可以重复使用吗？我们不建议重复使用玻璃底培养皿。细胞培养基质的表面特性对细胞结构和功能具有深远的影响。重复使用培养皿会给您的实验带来不受控制的变量，这可能会影响实验结果。 MatTek 的玻璃底培养皿适用于一次性实验。

显微镜类型和技术问题 10：玻璃底培养皿适合共聚焦和荧光显微镜吗？是的，MatTek’s 玻璃底培养皿非常适合共焦和荧光显微镜。优选 1.5 号玻璃厚度的餐具（例如 P35G-1.5-14-C 或 P50G-1.5-14-F）。重要的玻璃特性是：

波长超过 320 nm 的入射紫外线不会产生荧光。334 和 365 nm 的汞线不会产生自发荧光。 （注：对于汞照明，滤除波长短于 313 nm 的汞谱线，以获得最佳结果。）折射率 (@ 20°C)：nd= 1.5230 公差 ± 0.0015 阿贝数 V = 55。问题 11：如何使用诺马斯基微分干涉 (DIC) 显微镜的玻璃底皿？您需要同时订购玻璃底皿和玻璃盖。订购任何 P35G 培养皿（例如部件号：P35G-1.5-14-C 或 P35G-1.5-20-C）以及玻璃盖（部件号：P35GTOP-0-20-C）。玻璃底部和玻璃盖都是必需的，以便整个光路仅穿过高光学质量玻璃。格拉不锈钢盖可在重新消毒后重复使用，只需将其浸泡在 70% 乙醇中 30 分钟即可。盖子不能高压灭菌。问题 12：培养皿能否用于高分辨率技术，例如 GSDIM、dSTORM、PALM 或 TIRF 显微复制？可以。对于 GSDIM、dSTORM、PALM、TIRF 等高分辨率技术以及任何数值孔径 > 0.7 的物镜，严格控制盖玻片厚度至关重要。因此，使用采用高容差 1.5 号盖玻片 (0.170 ± 0.005 mm) 的部件号 P35G-0.170-14-C 培养皿是最佳选择。问题 13：为什么 50 毫米玻璃底培养皿可用于显微注射并保持培养皿中的恒定气氛？50 毫米玻璃底培养皿（部件号以 P50G- 开头）可用于： 显微注射：较大直径 (50 毫米) 和较低的侧壁（9 毫米）可以在显微注射实验中更轻松地接触细胞。气氛维护：50 毫米培养皿有一个盖子，可卡在培养皿底部，从而防止丢失当培养皿从培养箱中取出时，气氛为 5% CO2。这对于需要长时间观察培养皿的实验非常重要。问题 14：如何灌注在玻璃底培养皿中生长的细胞？Automate Scientific 和 Warner Instruments, Inc. 生产的灌注适配器与 MatTek 的 35 毫米系列玻璃底培养皿（部件编号：P35G-xx-xx-C）兼容。

培养皿属性

问题 15：我应该使用什么厚度的盖玻片？各种盖玻片编号对应什么？几乎所有显微镜物镜都针对 1.5 号盖玻片厚度进行了优化。对于更高数值孔径的盖玻片 (NA > 0.7)，使用 1.5 号厚度变得越来越重要。其他盖玻片厚度会导致光学畸变和分辨率损失。因此，对于绝大多数显微镜应用，1.5 号盖玻片厚度是最佳的（例如玻璃底皿部件号：P35G-1.5-xx-C、P50G-1.5-xx-F、P60G-1.5-xx-F 等）。

对于超高分辨对于溶液显微镜技术，我们提供高容差的 1.5 号盖玻片，其部件编号为 -0.170（例如部件编号：P35G-0.170-14-C）。

玻璃盖玻片的实际厚度取决于盖玻片编号/部件编号，如下所示：盖玻片编号/部件#厚度 (mm)00.085-0.131.00.13-0 .161.50.16-0.192.00.19-0.230.170*0.165-0.175

*指玻璃底皿中的 MatTek 名称，部件号：P35G-0.170-14-C。

还提供高容差、1.5 号厚度盖玻片 (170 ± 5 µm)（部件号 PCS） -170-1818).Q16: 用于将盖玻片固定到培养皿上的粘合剂是什么？虽然粘合剂的具体名称是专有的，但所使用的粘合剂是无毒的硅胶，可与多种细胞兼容，包括原代神经元和许多其他难以培养的挑剔细胞。Q17: 培养皿可以保存多长时间？涂层玻璃底培养皿可以在室温下黑暗中保存长达 1 年。无涂层培养皿可保存长达3年，细胞生长性能不会下降。问题18：玻璃底培养皿可以在什么温度范围内使用？玻璃底培养皿可以在-20°C至+45°C温度范围内使用。在 55°C (131°F) 及以上温度下，餐具会变形。玻璃底培养皿不能进行高压灭菌。问题 19：玻璃底培养皿中使用的玻璃有哪些特性？

MatTek 在我们的玻璃底培养皿中使用最高品质的硼硅酸盐德国玻璃盖玻片。盖玻片性能如下：

最高的耐水解性（水解等级 1）。优异的耐化学品性。碱释放量约为 15 至 24 µg Na2O/g 玻璃。荧光显微镜的优异性能。波长大于 320 nm 的紫外线入射不会产生荧光。334 和 365 nm 的汞线不会产生自发荧光。（注：对于汞照明，滤除波长小于 100 nm 的汞线） 313纳米至获得最佳结果。）折射率（@ 20°C）：nD ** = 1.5230 公差 ± 0.0015。阿贝数 V = 55。Q20：玻璃底皿的微孔有多深？

玻璃底皿中微孔的深度取决于皿的类型和皿底部的厚度，如下所示：

Corning 35 mm：0.70-0.75 mmFal con 50 mm：1.00-1.10 mmFalcon 60 mm：1.15-1.20 mmFalcon 100 mm：0.90-1.00 mm*Falcon 6 孔板：1.45-1.55 mmFalcon 12 孔板：1.45-1.55 mmFalcon 24 孔板：1.10-1.20 mmFalcon 96 孔板：1.05-1.25 mmQ21：玻璃底皿和多孔板的化学兼容性如何？它们可以与有机溶剂一起使用吗？

玻璃底培养皿和多孔板的主体由聚苯乙烯制成。因此，它们与有机溶剂的相容性有限。请参阅化学相容性表。溶剂化学相容性丙酮差氢氧化铵(1N)一般氢氧化铵(25%)一般苯胺良好丁醇良好氯仿Poor二甲基甲酰胺不良二甲亚砜(DMSO)不良DMSO/H2O (20/80)良好二恶烷不良不良乙醇良好己烷不良不良盐酸(25%)良好盐酸(浓)一般甲醇良好甲基乙基二酮不良二氯甲烷不良硝酸(25%)不良硝酸(浓缩)不良氢氧化钠良好甲苯不良二甲苯不良Q22 ：我怎么知道玻璃底培养皿是无菌的？所有玻璃底培养皿都经过 FDA 批准和认证的供应商的伽马射线照射。我们对餐具进行批量消毒，通常会同时对超过 5000 个单独的容器进行消毒。由于无菌是我们所有客户的绝对要求，因此我们使用过量的伽马剂量以确保无菌。灭菌后，对培养皿进行质量控制分析以验证无菌性：将培养皿在不含抗生素和抗真菌的培养基中孵育 7 天。另外，每个盒子上都有一个伽马辐照指示器，受到伽马射线照射后会变成红色。 Q23：高耐受性如何实现？P35G-0.170-14-C 培养皿与标准 P35G-1.5-14-C 有何不同？ P35G-0.170-14-C 培养皿可用于哪些应用？P35G-0.170-14-C 培养皿采用高容差 1.5 号厚度盖玻片（盖玻片厚度 = 0.170 +/- 0.005 毫米），而标准 P35G-1.5-14-C 培养皿（盖玻片厚度 = 0.175 +/- 0.015 毫米）。

对于共焦、荧光、GSDIM、dSTORM、PALM 全内反射 (TIRF) 和其他高数值孔径物镜中使用的任何高数值孔径物镜，P35G-0.170-14-C 碟形天线将比 P35G-1.5-14-C 碟形天线提高图像质量（见下图）。例如，使用 P35G-0.170-14-C 培养皿进行定量测量时，z 分辨率为 +/- 9.5%，而 P35G-1.5-14-C 培养皿中的 z 分辨率为 +/- 17.3% (n=5)。A B 

图：改进的 Z 轴分辨率 – 高容差玻璃盖玻片（在 P35G-0.170-14-C 玻璃底皿中）的效果亚再成像使用以下溶液珠：A) P35G-0.170-14-C 和 B) P35G-1.5-14-C 玻璃底皿。将 5 µl FITC 标记的 175 nm PS-Speck 亚分辨率珠添加到玻璃底培养皿的孔中并使其干燥。干燥后，添加 200 ul 水，并使用配备 Olympus UPLSAPO 60x (NA=1.2) 水浸物镜的 Zeiss LSM510 共焦显微镜对珠子进行成像。

图片和测量结果由芬兰于韦斯屈莱大学 Teemu Ihalainen 博士提供（2008 年）。

涂层

问题 24：用于涂覆 PDL 涂层玻璃底培养皿的聚 d-赖氨酸？用于涂覆 P35GC-x-xx-C 和 P50GC-x-xx-F 玻璃底培养皿的聚 d-赖氨酸的分子量范围为 70,000-150,000 道尔顿。问题 25：为什么培养皿涂有聚 d-赖氨酸（而不是聚-l-赖氨酸）？未经处理的玻璃和细胞都带负电荷。将聚赖氨酸涂在玻璃表面，使其带正电，从而增加静电玻璃表面和细胞之间的吸引力，从而改善细胞附着。聚-d-赖氨酸受到青睐，因为 d-对映体比天然存在的 l-对映体更不易被蛋白酶介导的分解。否则，聚-d-赖氨酸和聚-l-赖氨酸是等效的。问题26：胶原蛋白涂层玻璃底培养皿上涂有什么类型的胶原蛋白（部件号：P35GCol-x-xx-C或P50GCol-x-xx-F）？用于涂层P35GCol-x-xx-C或P50Gcol-x-xx-F玻璃底培养皿的胶原蛋白是1型鼠尾胶原蛋白。问题27：涂聚赖氨酸还是胶原蛋白？会影响玻璃底皿的光学性能吗？镀膜为单层镀膜，不会影响玻璃底皿的光学性能。

特殊订单

Q28：除了标准的 10 毫米、14 毫米和 20 毫米直径玻璃表面外，玻璃底皿还有其他直径吗？玻璃底皿直径为 7 毫米的玻璃底皿为标准产品（例如部件号 P35G-1.5-7-C 或 P35G）-0-7-C)。此外，50毫米、60毫米和100毫米培养皿配有直径30毫米的玻璃表面（例如部件#P50G-1.5-30-F、P60G-1.50-30-F、P100G-1.5-30-F），并且是标准产品；这些培养皿最大限度地提高了细胞生长的表面积。当需要保存非常昂贵的试剂时，也可根据特殊订单提供直径为 5 毫米玻璃表面的培养皿（例如部件号：P35G-1.5-5-C）。问题 29：特殊订单所需的交货时间是多少？有特殊订单费用吗？特殊订单商品可以退货吗？交货时间：特殊订单商品通常可以在收到采购订单后 2-3 周内生产。然而，玻璃底培养皿的批量灭菌仅每 6 周进行一次。因此，灭菌、特殊订单产品的交货时间可能在 3-8 周之间。注意：如果客户使用紫外线和/或 70% 乙醇对培养皿进行消毒（例如，如果使用 70% 乙醇，则在组织培养罩中在紫外线下消毒 40 分钟和/或浸泡），则可以缩短交货时间ol 30 分钟）。特殊订单费用：特殊订单费用：特殊订单3箱及以上，无特殊订单费用；但是，对于少于 3 箱的特殊订单，将收取特殊订单费用。退货政策：特殊订单商品不可退货。

MatTek 室式细胞培养载玻片Q30：MatTek 室式细胞培养载玻片的孔尺寸是多少？每孔应使用多少培养基？产品 孔尺寸 (mm) 培养基体积/孔 (mL)CCS-223.0 x 22.21.2 – 2.5CCS-423.0 x 11.40.5 – 1.3CCS-811.5 x 11.40.2 – 0.6Q31：我可以使用倒置显微镜观察在 MatTek 室式细胞培养载玻片 (CCS) 中培养的细胞吗？ )？是的，可以使用倒置示波器观察 CCS 上生长的细胞。染色你的细胞并取下塑料上室。使用封固剂并将样品盖玻片到载玻片上。 MatTek 盖玻片，部件号：PCS-1.5-5024（1.5 号厚度 50 mm x 24 mm），专为盖玻片设计ping 在 CCS 上培养的样品。Q32：作为 MatTek 室式细胞培养载玻片基础的显微镜载玻片的尺寸是多少？显微镜载玻片的尺寸为：长度：75.0 毫米，宽度：25.0 毫米，高度：1.0 毫米。 Q33：取下上室后，显微镜载玻片上是否会留下任何东西？上室和显微镜载玻片下方有一个硅胶垫圈。当腔室被移除时，垫圈通常会从载玻片上松开。但是，如果垫圈保留在显微镜载玻片上，则可以使用细尖镊子轻松将其从显微镜载玻片上剥离。 Q34：如果我需要超过 8 个孔，该怎么办？尽管我们不生产超过 8 孔的细胞培养载玻片，但 MatTek 玻璃底板可提供 12、24、48、96 和 384 孔。